| Enzim endonuklease restriksi dalam penelitian ini diekstrak dari bakteri Escherichia coli yang berasal dari sampel es sirup di Jakarta. Ekstraksi dilakukan menggunakan cara sonikasi dan dipurifikasi dengan kromatografi afinitas menggunakan matriks HiTrap Heparine (elusi dengan NaCl 0-2 M pH 7). Dari tujuh fraksi puncak yang diperoleh, fraksi D7 merupakan satu-satunya fraksi yang memiliki aktivitas endonuklese restriksi. Pada fraksi D7 tersebut dilakukan karakterisasi yang meliputi, variasi volume penggunaan enzim, ion logam, suhu, dan pH. Karakterisasi enzim D7 menggunakan substrat DNA plasmid pBR322 dan fage lambda. Pada plasmid pBR322 dihasilkan satu pita linier dan pada fage lambda diperoleh empat pita hasil pemotongan. Berdasarkan jumlah pita hasil pemotongan tersebut, enzim D7 diduga merupakan isoschizomer dari enzim Eco52I. Enzim D7 ini bekerja cukup baik pada range suhu antara 37-50°C, pH 7.5-9, dan aktivitasnya tidak begitu terpengaruh oleh kehadiran ion logam. Kehadiran ion logam MnCl2 70 mM hanya memberikan hasil yang sedikit lebih baik. |