Detail Karakteristik Enzim Endonuklease Restriksi dari Bacillus Circulans Lokal Asal Tangkuban Perahu Bibliografi Author: Stella, Prici ; Suhartono, Maggy Thenawidjaja (Advisor) Topik: Karakteristik Enzim Endonuklease Restriksi dari Bacillus Circulans Lokal Asal Tangkuban Perahu Bahasa: (ID )     Penerbit: Fakultas Teknobiologi Unika Atma Jaya (Faculty of Biotechnology Atma Jaya Catholic University of Indonesia)     Tempat Terbit: Jakarta    Tahun Terbit: 2007     Jenis: Theses - Undergraduate Thesis Fulltext: Prici Stella's Undergraduate theses.pdf (392.16KB; 8 download) Ketersediaan Perpustakaan Pusat (Semanggi) Nomor Panggil: FTB-032 Non-tandon: tidak ada Tandon: 1  Lihat Detail Induk Abstract Bacillus circulans yang diisolasi dari tanah Tangkuban Perahu digunakan sebagai sumber isolat penghasil enzim endonuklease restriksi. Bakteri ini bersifat gram positif dan dapat membentuk spora. Isolat B. circulans ditumbuhkan pada media Luria broth hingga mencapai fase logaritmik dan pelet sel dikumpulkan dengan cara sentrifugasi. Dinding sel dipecah dengan cara penggerusan oleh bubuk alumina yang disuspensikan dalam bufer ekstraksi. Debris sel dan alumina dihilangkan dengan cara sentrifugasi. Supernatan yang mengandung crude enzim disuspensikan kembali dengan bufer yang sama. Asam nukleat dihilangkan dari crude enzim dengan presipitasi menggunakan streptomisin sulfat. Supernatan yang mengandung crude enzim dipresipitasi menggunakan padatan ammonium sulfat dengan putaran konstan pada suhu 4 oC. Presipitat diresuspensi ke dalam bufer fosfat, kemudian dilakukan tahap penghilangan garam (desalting) dengan matriks G25 sephadex pada kolom Hitrap desalting. Fraksi hasil desalting dimurnikan menggunakan dua matriks berbeda pada kolom kromatografi (matriks HiTrap Heparin dan matriks HiTrap DEAE sepharose) dan dielusi dengan gradien NaCl 0-2 M. Sampel enzim direaksikan pada substrat plasmid pBR322 dengan waktu inkubasi selama 3 jam pada suhu 37 oC. Hasil reaksi diamati pada gel elektroforesis dengan waktu running selama 60 menit, 80 volt. Aktivitas optimum didapatkan pada saat penambahan garam NaCl 50 mM dan MgCl2 50 mM. Sampel enzim dapat memotong plasmid pBR322 menjadi dua pita sedangkan pemotongan dengan Enzim BamHI komersil menghasilkan 1 pita potongan. Digesti ganda antara Enzim BamHI komersil dan sampel enzim menunjukkan hasil pemotongan yang serupa dengan hasil pemotongan sampel enzim. Sampel enzim dapat memotong substrat faga lambda setelah dimurnikan dengan kolom kromatografi, baik dengan kromatografi afinitas maupun dengan kromatografi pertukaran ion. Hasil pemotongan terbaik didapatkan pada saat enzim dimurnikan dengan kolom kromatografi pertukaran ion menggunakan gradien NaCl 0M – 1M. Opini Anda Klik untuk menuliskan opini Anda tentang koleksi ini! Lihat Sejarah Pengadaan  Konversi Metadata   Kembali

Copyright © 2006, 2007 Unika Atma Jaya, all rights reserved